4.13 Hunanamycin A
Hunanamycin A（4.25）是首个具有吡啶并[1,2,3-de]喹喔啉-2,3-二酮骨架结构的天然产物，由Hu 等[15]从海洋来源的Bacillus hunanensis 中分离得到。
Hunanamycin A 是一种与核黄素降解产物相关的天然产物，其结构经历了N-异戊烯基化及随后的环化反应而形成。该化合物的结构及其立体化学构型通过核磁共振（NMR）和质谱（MS）技术得以全面解析。
Hunanamycin A 以浅黄色玻璃状物形式被分离纯化。高分辨电喷雾质谱（HRESIMS）分析显示，其分子离子峰[M+H]⁺位于m/z 393.2018，与分子式C₂₀H₂₈N₂O₆（计算值：393.2025）相符，不饱和度为8。
为全面解析Hunanamycin A 的分子结构，采用了多种核磁共振技术，包括¹³C NMR、¹H NMR、HSQC、HMBC 和COSY 谱图（表4.13）。
基于这些光谱数据，构建了经过适当编辑的分子连接图（MCD），如图4.31 所示。
Table 4.13 Hunanamycin A：核磁共振（NMR）光谱数据
MCD 概述分子中包含六个氧原子、两个氮原子以及四个可自由交换的氢原子，因此在结构生成过程中需要综合考虑所有可能的OH、NH 和NH₂基团组合，这不可避免地导致输出文件规模的显著增加。为了在不引入高风险假设（“公理”）的前提下降低问题的复杂度，对部分碳原子的杂化状态进行了明确标记：两个浅蓝色标记的碳原子（sp²或sp³杂化）C 123.3 和C 126.2被指定为sp²杂化，而化学位移分别为70.60、74.40 和75.00 ppm 的次甲基碳原子，其连接的氢原子化学位移值在3.75 至4.25 ppm 范围内，被标记为与杂原子邻接（“ob”标签）。
在二维NMR 数据中未检测到非标准连接性，因此启动了严格结构生成过程，并结合13C化学位移预测，排除了平均偏差超过4 ppm 的结构。结果显示，候选结构数k = 10,281 →2 →1，总耗时为18 秒。
生成的单一结构及其平均偏差值，以及相应的13C 化学位移归属如图4.32 所示。
将该结构与结构4.25 进行对比，结果表明，新型抗生素Hunanamycin A 的结构在最小假设条件下几乎被自动且准确地识别。
为进一步完善研究，重新进行了结构生成，未对碳原子C 123.3 和C 126.2 的杂化状态进行sp²标记，而是由程序自动分配。结果显示，候选结构数k = 175,621 →2 →1，总耗时为5 分钟。对比两种解决方案的结果，直观地展示了化学家引入的约束条件在结构解析中的关键作用。